研磨儀研磨動(dòng)物器官組織的實(shí)驗(yàn)步驟
發(fā)布時(shí)間:2017-05-17 來源: 編輯:admin
實(shí)驗(yàn)步驟
每50~100mg 組織加入0.2體積 TRIzol
1.加鋼珠1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù):12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿
2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯仿,蓋緊管蓋,手動(dòng)劇烈震搖15 秒鐘,然后室溫靜置2~3 分鐘。
3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
4. 小心吸取上層水相(無色)加入到新試管中,同時(shí)計(jì)算所吸取的水相體積。不必過多吸取,防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)(中間層,白色)。
5. 加入所吸取水相等體積預(yù)冷的異丙醇,蓋緊管蓋,輕輕搖勻。
6. 室溫靜置10 分鐘,待RNA 充分沉淀(為減少RNA 降解,此步驟可省略)。
7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
8. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),每管加入0.2體積75%乙醇潤(rùn)洗,蓋緊管蓋,輕輕晃動(dòng)試管,以去除殘留的異丙醇和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。
9. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,將RNA 沉淀干燥(室溫?fù)]發(fā)或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否則難以溶解。
10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,將使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn),或者-70℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果