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全自動樣品冷凍研磨儀對擬南芥或水稻穗進(jìn)行研磨破碎
發(fā)布時間:2017-05-26 來源: 編輯:admin

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

對擬南芥或水稻穗進(jìn)行研磨破碎,進(jìn)而提取其DNA。

實(shí)驗(yàn)原理

通過研磨珠的撞擊,充分?jǐn)M南芥或水稻穗細(xì)胞,使其內(nèi)容物流出,進(jìn)而提取目標(biāo)成分。

實(shí)驗(yàn)材料和器具

樣品:擬南芥或水稻穗

儀器:全自動樣品冷凍研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-48)

耗材:離心管,不銹鋼研磨珠(上海凈信)

試劑:TPS溶液(100mM Tris-Cl (pH 8.0),10mM EDTA (pH 8.0),1M KCl)

實(shí)驗(yàn)步驟

1.取一片擬南芥的葉片(或10d左右的小苗),加入兩毫升EP管中。

2.加鋼珠1顆

3.加TPS提取液0.02ml

4.設(shè)置研磨儀參數(shù)10單位頻振,1min。(水稻嫩葉設(shè)置45S,12單位頻振;老葉設(shè)置70S,12單位頻振)

5.離心(4000rpm,1min),將打碎的組織和提取液一起轉(zhuǎn)移至96孔板中。

6.96孔板加蓋子,75°加熱15min

7.大離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速10min

8.取上清,轉(zhuǎn)入另一塊96孔板,加入等體積的異丙醇。

9.加蓋子,混勻

10.4°下10min或-20°下10min,如材料很多此步驟可省略。

11.最高轉(zhuǎn)速離心10min。

12.棄上清,加入0.04ml 70%乙醇。

13.最高轉(zhuǎn)速離心10min

14.棄去乙醇,37°放置20-30min烘干

15.加入0.016ml水,65°放置10min

16.離心除去氣泡,之后可以直接用于PCR實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1.-20°下該方法的DNA可以保存4個月以上,4°大致可以放2-3周。

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