全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀破碎大腸桿菌的細(xì)胞壁的實(shí)驗(yàn)方法
發(fā)布時(shí)間：2017-05-31 來源： 編輯：admin
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對(duì)大腸桿菌進(jìn)行破壁，提取其蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)原理
通過研磨珠的撞擊，破碎大腸桿菌的細(xì)胞壁，使其內(nèi)容物流出，進(jìn)而提取其蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)材料和器具
樣品：大腸桿菌
儀器：全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀（上海凈信，JXFSTPRP-96）
耗材：離心管，研磨珠（上海凈信，1號(hào)）
實(shí)驗(yàn)步驟
1.IPTG誘導(dǎo)表達(dá)的大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)離心后棄沉淀，在加入2體積 PBS重懸細(xì)胞團(tuán)塊后，以移液槍將其加入含有1號(hào)玻璃研磨珠的離心管中；
2.將上述離心管放入多樣品組織研磨機(jī)中，在13單位振頻條件下震蕩90s；
3.取出離心管在4o c離心，保存上清液S1，以備上述檢測；
4.向每個(gè)1號(hào)玻璃珠離心管中加入0.2ml 8M 尿素溶液后，再放入多樣品組織研磨機(jī)中，在13單位振頻條件下震蕩90s,可見混濁液變清；
5.離心后收集上清液S2與S1（各0.002ml）在SDS-Page上電泳檢測。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖注：泳道3：marker
泳道2：0號(hào)對(duì)照
泳道1:含8M尿素上清
泳道0：bingding buffer 上清
泳道 0 1 2 3
本蛋白形成包涵體，在使用此研磨機(jī)后進(jìn)行上樣電泳。圖譜清晰，說明本研磨機(jī)適用于含包涵體菌體的破碎。
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