高通量組織研磨儀研磨破碎腫瘤組織細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟
發(fā)布時(shí)間:2017-05-31 來(lái)源: 編輯:admin
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研磨破碎腫瘤組織細(xì)胞(如胰腺、肺、肝等器官的腫瘤組織),后續(xù)提取其RNA。
實(shí)驗(yàn)原理
通過(guò)研磨珠撞擊腫瘤組織細(xì)胞,使其細(xì)胞膜破裂,其內(nèi)的RNA暴露。
實(shí)驗(yàn)材料和器具
樣品:腫瘤組織細(xì)胞
儀器:高通量組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-48)
耗材:離心管(上海凈信,0.4研磨單位),研磨珠(上海凈信,3號(hào))
實(shí)驗(yàn)步驟
1.取組織塊解凍,用生理鹽水洗去血污,剪取約0.5g組織,剪小放入0.4研磨單位離心管中;
2.加入一粒6號(hào)的研磨珠,(如果用0.3研磨單位的離心管,加入三或五粒的3號(hào)的研磨珠),加入0.09體積 TES混勻,再加入0.01ml SDS(10%),0.001ml蛋白酶K(20mg/ml),充分混勻;
3.離心管放入研磨機(jī)中,設(shè)置參數(shù)13單位振頻,60秒,程序結(jié)束即可得到破碎原液;
4.完成后續(xù)RNA提取步驟。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果